Tuesday, March 5, 2024
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यूनिवर्सल ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक: दक्षता में सुधार और सेल विषाक्तता को कम करना

टीसंक्रमण डीएनए, आरएनए, और छोटे गैर-कोडिंग आरएनए जैसे सीआरएनए, shRNA, और miRNA सहित विदेशी न्यूक्लिक एसिड को पेश करके यूकेरियोटिक कोशिकाओं के आनुवंशिक मेकअप को बदल देता है। शोधकर्ताओं को सेलुलर प्रक्रियाओं को चिह्नित करने और आणविक रोग तंत्र का अध्ययन करने में सक्षम करके सेलुलर अनुसंधान को आगे बढ़ाने और दवा की खोज को बढ़ाने के लिए वैज्ञानिक ट्रांसफेक्शन तकनीकों का उपयोग करते हैं।1-3

एक सफल ट्रांसफेक्शन की योजना बनाना

शोधकर्ता ट्रांसफ़ेक्टेड न्यूक्लिक एसिड को ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स के रूप में या एक वायरल या प्लास्मिड वेक्टर में वितरित करते हैं, जो आनुवंशिक सामग्री को मेजबान कोशिकाओं में ले जाता है। अभिकर्मक स्थिर या क्षणिक हो सकता है। स्थिर अभिकर्मक परिणाम निरंतर, दीर्घकालिक अभिव्यक्ति में होता है, जबकि अभिव्यक्ति अंततः क्षणिक अभिकर्मक के बाद खो जाएगी क्योंकि मेजबान कोशिकाएं दोहराती हैं। वैज्ञानिक दीर्घकालिक और बड़े पैमाने पर आनुवंशिक और औषध विज्ञान अध्ययनों के लिए स्थिर अभिकर्मक लागू करते हैं। क्षणिक अभिकर्मक अल्पकालिक अध्ययन के लिए उपयोगी है, जैसे कि जीन नॉक-इन या नॉक-डाउन के प्रभावों की जांच करना।2

अभिकर्मक प्रयोगों की योजना बनाते समय, शोधकर्ताओं को पहले न्यूक्लिक एसिड को लक्ष्य कोशिकाओं में स्थानांतरित करने के लिए एक वितरण विधि का चयन करना चाहिए। वितरण विधि भौतिक हो सकती है, जैसे कि इलेक्ट्रोपोरेशन, या रासायनिक जिसमें लिपिड-आधारित या नॉनलिपिड-आधारित अभिकर्मक शामिल हैं। वितरण के तरीके मेजबान सेल की सतह को प्रभावित करते हैं और सेल में न्यूक्लिक एसिड के प्रवेश की सुविधा प्रदान करते हैं। रासायनिक वितरण विधियों के मामले में, अभिकर्मक कोशिका झिल्ली के साथ संपर्क बढ़ाने के लिए न्यूक्लिक एसिड के साथ एक जटिल बनाता है। सेल को सफलतापूर्वक ट्रांसफ़ेक्ट करने की क्षमता सेल प्रकार, प्रोटोकॉल और ट्रांसफ़ेक्शन रिएजेंट की संरचना से भिन्न होती है।1,2

अभिकर्मक चुनौतियां

Roche® की ओर से X-tremeGENE™ ट्रांसफ़ेक्शन अभिकर्मकों के चार नीले कंटेनर।

कोशिका की सतह पर अभिकर्मक अभिकर्मकों के प्रभाव के कारण अभिकर्मक अक्सर साइटोटोक्सिसिटी का कारण बनता है, जो कोशिकाओं पर दबाव डाल सकता है। इसके अतिरिक्त, अभिकर्मक अभिकर्मक महंगे हो सकते हैं और अत्यधिक विशिष्ट अनुप्रयोग हो सकते हैं, इसलिए शोधकर्ताओं को अक्सर न्यूक्लिक एसिड और सेल प्रकारों के आधार पर विभिन्न अभिकर्मकों को खरीदने की आवश्यकता होती है। अभिकर्मक अभिकर्मकों का चयन करते समय, शोधकर्ताओं को अपने प्रयोग के लिए सेल प्रकार और संस्कृति स्थितियों की पहचान करनी चाहिए। दुर्लभ सेल संस्कृतियों जैसे कि न्यूरॉन्स या प्राथमिक कोशिकाओं को ऐसे अभिकर्मकों की आवश्यकता होती है जो हार्ड-टू-ट्रांसफ़ेक्ट कोशिकाओं में न्यूक्लिक एसिड वितरण की सुविधा प्रदान करते हैं। शोधकर्ताओं को उपयुक्त अभिकर्मक अभिकर्मक का चयन करने से पहले अभिकर्मक की मात्रा पर भी विचार करना चाहिए, क्योंकि यह लागत और विषाक्तता को प्रभावित करेगा। आदर्श उत्पाद एक शोधकर्ता की जरूरत के विभिन्न अभिकर्मकों की संख्या को कम करेगा और उनके प्रयोगों की प्रभावशीलता को अनुकूलित करेगा। इसलिए, एक आदर्श अभिकर्मक में कई अनुप्रयोग, कम साइटोटोक्सिसिटी और उच्च अभिकर्मक दक्षता होती है।1-3

X-tremeGENE™ Roche . से अभिकर्मक अभिकर्मकों® सामान्य से दुर्लभ और प्राथमिक कोशिकाओं तक, कई प्रकार की कोशिकाओं को कुशलता से संक्रमित करता है। लेंटिवायरल उत्पादन, जीन नॉक-डाउन और जीन-एडिटिंग सहित विभिन्न अनुप्रयोगों में विभिन्न प्रकार के अणुओं को वितरित करने के लिए वैज्ञानिक अपनी प्रयोगात्मक जरूरतों के आधार पर एक्स-ट्रीमजेन ™ ट्रांसफेक्शन अभिकर्मकों की एक श्रृंखला से चुन सकते हैं।1,4–7

एक ऑल-इन-वन समाधान

विभिन्न प्रयोगों में उपयोग करने के लिए एक-एक-एक अभिकर्मक की तलाश करने वाले शोधकर्ता नए का चयन कर सकते हैं X-tremeGENE™ 360 ट्रांसफेक्शन रिएजेंट, कई अलग-अलग सेल प्रकारों में विभिन्न प्रकार के न्यूक्लिक एसिड पहुंचाने के लिए एक उच्च प्रदर्शन करने वाला, बहुमुखी और विश्वसनीय समाधान। यह अभिनव अभिकर्मक डीएनए या आरएनए के साथ एक जटिल बनाता है और उच्च दक्षता वाले जानवरों या कीट कोशिकाओं में सीआरएनए/एमआईआरएनए, प्लास्मिड डीएनए, और सीआरआईएसपीआर/कैस9 सामग्री को ट्रांसफ़ेक्ट कर सकता है। यह एक सार्वभौमिक बहुलक है जिसे यूकेरियोटिक कोशिकाओं की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए डिज़ाइन किया गया है, जिसमें कई सेल लाइनें शामिल हैं जो अन्य अभिकर्मकों द्वारा अच्छी तरह से ट्रांसफ़ेक्ट नहीं हैं। X-tremeGENE™ 360 रिएजेंट सीरम की उपस्थिति या अनुपस्थिति में अच्छी तरह से काम करता है और शोधकर्ता इसका उपयोग क्षणिक ट्रांसफ़ेक्शन, स्थिर ट्रांसफ़ेक्शन, siRNA अभिव्यक्ति और CRISPR जीन संपादन के लिए कर सकते हैं। अंत में, X-tremeGENE™ 360 अभिकर्मक लागत और समय प्रभावी है। X-tremeGENE™ 360 ट्रांसफेक्शन रिएजेंट के 1 मिलीलीटर का उपयोग 96-वेल प्लेट्स में 10,000 संक्रमण तक करने के लिए किया जा सकता है। चूंकि यह कोशिकाओं की पर्याप्त संख्या में ट्रांसफ़ेक्ट होने पर न्यूनतम साइटोटोक्सिसिटी और सेल आकारिकी परिवर्तन पैदा करता है, यह ट्रांसफेक्शन रिएजेंट को जोड़ने के बाद मीडिया को बदलने की आवश्यकता को समाप्त करता है, जिससे समय और मीडिया खर्च की बचत होती है।1,6 न्यूनतम साइटोटोक्सिसिटी के साथ यह सार्वभौमिक और प्रभावी ट्रांसफेक्शन अभिकर्मक शोधकर्ताओं के लिए एक आकर्षक समाधान है जो अपने ट्रांसफेक्शन प्रोटोकॉल को अनुकूलित करने और अपने सेल संस्कृति कक्ष फ्रीजर को अस्वीकार करने की मांग कर रहे हैं।

संदर्भ

  1. “X-tremeGENE™ अभिकर्मक अभिकर्मक तुलना मार्गदर्शिका,” https://www.sigmaaldrich.com/CA/en/technical-documents/technical-article/genomics/advanced-gene-editing/general-recommendation-for-transfection-reagent-selection4 सितंबर, 2022 को एक्सेस किया गया।
  2. ZX चोंग एट अल।, “ट्रांसफेक्शन प्रकार, विधियों और रणनीतियों, एक तकनीकी समीक्षा,” पीरजे9:1-37, 2021।
  3. “सेल ट्रांसफ़ेक्शन का परिचय,” https://www.sigmaaldrich.com/US/en/technical-documents/technical-article/cell-culture-and-cell-culture-analysis/transfection-and-gene-editing/transfection-reagents4 सितंबर, 2022 को एक्सेस किया गया।
  4. “X-tremeGENE HP Transfection अभिकर्मक का उपयोग करके लेंटिवायरल उत्पादन,” https://www.sigmaaldrich.com/US/en/technical-documents/protocol/cell-culture-and-cell-culture-analysis/transfection-and-gene-editing/xtghp-lenti-protocol4 सितंबर, 2022 को एक्सेस किया गया।
  5. “X-tremeGENE™ HP DNA ट्रांसफ़ेक्शन रिएजेंट,” https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/roche/xtghpro4 सितंबर, 2022 को एक्सेस किया गया।
  6. “X-tremeGENE™ 360 ट्रांसफेक्शन रिएजेंट,” https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/roche/xtg360ro4 सितंबर, 2022 को एक्सेस किया गया।
  7. “X-tremeGENE™ 9 डीएनए अभिकर्मक अभिकर्मक,” https://www.sigmaaldrich.com/US/en/product/roche/xtg9ro4 सितंबर, 2022 को एक्सेस किया गया।
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